Objetivo: Separar moléculas de ADN según su tamaño. Esto se puede hacer con fines forenses, para buscar enfermedades en genes específicos o pruebas de paternidad.
Breve descripción: El ADN está cargado negativamente, para separarlo por tamaño se pone en una solución con una corriente que lo atraviesa y tira del ADN cargado negativamente hacia el extremo opuesto.
Los trozos de ADN más grandes encuentran más resistencia en la solución y, por lo tanto, no se mueven tan lejos como los segmentos más pequeños después del mismo tiempo.
Una vez pasada la corriente eléctrica, se añade un tinte para poder ver las bandas de ADN (también conocidas como carriles), y en función de su ubicación se conoce la longitud del ADN (medida en pares de bases).
Cómo funciona
El proceso consta de enzimas de restricción, un peine, un tampón, gel de aragosa, ADN, un estándar de tamaño y una caja de electroforesis.
Vocabulario
Buffer: Solución polar que permite que las cargas eléctricas fluyan a través del gel.
Cargando búfer: Un tinte de seguimiento hecho principalmente de azul de bromofenol en una solución de glicerol al 50 % (pero podría ser xileno cianol y sacarosa). El glicerol espesa el ADN, lo que significa que se hundirá en el gel en lugar de flotar en el tampón.
Enzimas de restricción: Bacterias que cortan el ADN en secuencias específicas.
Carriles: Bandas de ADN que se forman en el gel.
Pasos básicos
- El aragonés y el tampón se mezclan y se calientan en el microondas para crear el gel. Se vierte en un molde y se le coloca un “peine” para hacer agujeros para insertar el ADN. Una vez que se ha enfriado se retira el peine.
- Luego se coloca el gel en la caja de electroforesis en gel y se vierte sobre él una solución tampón. El amortiguador conduce la corriente.
- Para preparar el ADN se deben utilizar enzimas de restricción.
- El ADN se inserta en los agujeros (así como el tamaño estándar) utilizando una micropipeta. El estándar de tamaño ya contiene un tampón de carga, pero las muestras de ADN lo requieren. El tampón de carga tiñe el ADN y lo vuelve más espeso.
- Luego se enciende la corriente eléctrica. El lado donde se coloca el ADN está cargado negativamente y el lado opuesto es positivo. La columna vertebral de fosfato en el ADN es negativa y la empuja hacia el lado positivo. El ADN repele la carga negativa iniciando el movimiento.